HBA® Assay / PICSI® Dish / SpermSlow™ を用いて精子の評価と正常な成熟精子の選択を

HBA® Assayを用いることで射出精子におけるDNAや染色体に異常の少ない成熟精子の割合を知ることが出来ます。その結果でICSIを行う際に、PICSI® DishまたはSpermSlow™を用いた正常な成熟精子の選択を行うべきかどうかの方針を固めることが出来ます。なお、Worrillowらが2012年に発表した内容によると、総運動精子における結合精子の割合（HBAスコア）が65%以下の場合は、生理学的な精子選別を行った後のICSI(PICSI)を実施したほうが有効であると報告されています。

成熟した精子とヒアルロン酸の関係

正常な成熟精子は卵子と受精するため卵丘細胞複合体に存在するヒアルロン酸に結合するための因子が発現しています。この因子が発現している精子はDNA断片化の割合が低いことが報告されています。⁷

正常な成熟精子を選ぶことのメリット・重要性

ヒアルロン酸による精子選別を行うことで、以下のような精子を選択することが出来ます。
・ 余分な細胞質を含まない成熟精子
・ ヒストンの残存がない精子
・ DNA断片化のリスクが低い精子

左よりクレアチンキナーゼによる免疫染色、アニリンブルーによる蛍光染色、ニックトランスレーション法によるDNA断片化標識です。

ヒアルロン酸に結合した、正常性の高い精子を選択することで、胚が異数体となるリスクを軽減します。⁵

① カバーガラスを外して、赤枠に調整済みの精子を滴下します。

② カバーガラスを被せます。カバーガラスの青円にはあらかじめ、格子状のグリッド線が描かれています。その状態でしばらくの間、室温またはインキュベーターで静置します。

③ 正立顕微鏡にセットします

④結合している精子の数を数えて、HBAスコアを計算します。得られたスコアは、cIVF・ICSI・PICSIなどの治療方針を決める参考情報にします。¹

① 精子洗浄液（またはハンドリングメディウム）をヒアルロン酸のマイクロドットを覆うよう帯状に滴下します。（必要であれば、デュッシュ上部に不動化用PVPなどを滴下した後に）ディッシュをオイルで満たします。

② しばらく静置させた後に、精子洗浄液（またはハンドリングメディウム）のヒアルロン酸のマイクロドットとは反対側に精子懸濁液を滴下します。

③ ヒアルロン酸のマイクロドットを観察して頭部が結合している精子を選択します。

① 精子洗浄液（またはハンドリングメディウム）を帯状に分注して、SpermSlowを精子洗浄液の一端にかかるように滴下します。

② 精子懸濁液を、精子洗浄液のSpermSlowとは反対側に滴下します。ディッシュをオイルで満たします

③ SpermSlowのドロップと精子洗浄液の境界あたりを観察し、ヒアルロン酸の三次元ネットに結合している精子を選択します。